Detalles del servicio
La pirosecuenciación es una tecnología de detección basada en el principio de secuenciación por síntesis, la cual provee datos cuantitativos en tiempo real. Permite realizar diversos tipos de análisis, tales como:
Caracterización de variaciones en la secuencia de ADN:
- Detección y cuantificación de inserciones-deleciones (indels) y mutaciones desconocidas.
- Genotipificación de polimorfismos de nucleótido simple (SNPs).
- Cuantificación de frecuencias alélicas.
- Posibilidad de detección de los distintos tipos de variaciones en el mismo ensayo.
Cuantificación de niveles de metilación de ADN tanto en islas CpG como en sitios no-CpG.
Secuenciación de novo de fragmentos cortos de ADN.
Requisitos generales para el diseño del experimento
- Las muestras deben ser amplificadas por PCR, marcando con biotina uno de los cebadores (forward/reverse primer), dependiendo del diseño del experimento.
- Debe incluirse el diseño de un primer interno de secuenciación que debe ser complementario a la cadena biotinilada.
- Las muestras amplificadas por PCR deben ser chequeadas en gel y poseer buena señal.
- El tamaño de los amplicones no debe exceder los 200pb.
- Los productos de PCR no requieren purificación previa.
- Las muestras destinadas a metilación deben ser tratadas con bisulfito previamente a la amplificación con PCR.
Doctora Nadia Castillo
CPA
Correo electrónico: servicios@igevet.gob.ar